Nuova tecnica tracce infezioni virali, favorisce lo sviluppo di farmaci antivirali

Marzo 31, 2016 Admin Salute 0 1
FONT SIZE:
fontsize_dec
fontsize_inc

Gli scienziati del Naval Research Laboratory Center for Bio-Molecular Science and Engineering hanno sviluppato un metodo per rilevare la presenza di virus nelle cellule e studiare la loro crescita. Targeting un virus che ha l'acido ribonucleico (RNA), come il suo corredo genetico, la nuova tecnica denominata bloccato acidi nucleici (LNA) citometria a flusso-ibridazione in situ fluorescente (flow-FISH), coinvolge il legame di una sonda LNA di RNA virale .

Mentre le singole parti della tecnica sono state sviluppate in precedenza, DRS. Kelly Robertson e Eddie Chang, in collaborazione con i ricercatori del laboratorio nazionale di riferimento Lab per biosensori e Biomateriali, dimostrano per la prima volta che la combinazione di sonde LNA con flow-FISH può essere utilizzato per quantificare l'RNA virale nelle cellule infette. Ciò consente inoltre agli scienziati di monitorare i cambiamenti di RNA virale trattamento farmaco antivirale di accompagnamento.

Una volta che la sonda è vincolato alla RNA virale nelle cellule di mammifero, è etichettato con un colorante fluorescente, poi migliaia di queste cellule marcate vengono misurate rapidamente da "citofluorimetria" - un metodo per il conteggio e l'esame di particelle microscopiche, come le cellule e cromosomi, sospendendole in un flusso di fluido e passando da un apparato di rilevamento elettronico.




"La capacità di misurare rapidamente migliaia di cellule per la presenza di virus, questa tecnica mette a parte i metodi attualmente utilizzati per monitorare la replica virale" detto Robertson.

Tradizionalmente, gli anticorpi utilizzati per rilevare i virus devono essere prodotti e calibrati per ogni ceppo specifico e sono altamente suscettibili alle mutazioni virali. Saggi comunemente utilizzati per quantificare carichi virali e per lo sviluppo di farmaci può richiedere molto tempo e contare su segni visibili di danno cellulare, che non è prodotto in tutti i virus e può richiedere lunghi periodi di tempo a verificarsi.

Tecniche come reazione inversa quantitativa a catena della trascrizione-polimerasi (qRT-PCR), microarrays, e enzyme-linked saggi immunoassorbimento (ELISA), mentre molto sensibile, coinvolgere la lisi [la rottura] di cellule prima della misura e sono quindi in grado di fornire informazioni sulla vitalità cellulare, fenotipi cellulari infettate, percentuale di cellule infettate o la variazione della infezione in una popolazione di cellule. La sonda LNA si differenzia dalle sonde nucleotide tradizionali legandosi più strettamente al suo RNA bersaglio.

LNA-flow FISH presenta un modo semplice e veloce per lo screening per composti con attività antivirale e potrebbe essere adattato per monitorare infezioni nel sangue per la terapia e lo sviluppo di vaccini. Questo metodo aggiunge uno strumento indispensabile per diverse aree emergenti biologia cellulare che consente l'utilizzo di misurazioni high throughput per intere popolazioni e migliora analisi statistiche.

"Questo metodo può essere ampliato con l'aggiunta di più di un tipo di sonda LNA per consentire l'individuazione di più di diversi RNA virale e di accoglienza", aggiunge Robertson. "Il miglioramento multiplexing può essere utilizzato per comprendere meglio agenti infettivi, permettendo questa tecnica per essere utilizzato per aiutare nello sviluppo di farmaci antivirali per una varietà di virus".

LNA flow-FISH offre un vantaggio rispetto ad altre tecniche per la sua semplicità e la superiorità. Metodi coinvolgono ricombinazione genetica del virus di esprimere una proteina fluorescente come mezzo per marcare la presenza del virus può utilizzare citometria a flusso per l'analisi su larga lotto di cellule infettate. Tuttavia, un'eccezione a questo approccio è ceppi virali che non hanno acquisito mutazioni genetiche, noto come virus wild-type (come i ceppi di virus dell'immunodeficienza umana-HIV), che richiederebbero un grande investimento iniziale di lavoro per ingegneria ciascun virus di interesse .

(0)
(0)

Commenti - 0

Non ci sono commenti

Aggiungi un commento

smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile smile smile smile smile
smile smile smile smile
Caratteri rimanenti: 3000
captcha